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Nadh para que sirve
Nadh para que sirve del momento
ribosido de nicotinamida
Puedo confirmar que para el ab65348 el rango de detección es de 1-100 pmoles por pocillo como se muestra en la curva STD (hoja de datos del producto en línea). El límite de detección es de 1 pmole en el volumen de muestra añadido en el pozo.
Gracias por su pregunta sobre cómo ensayar células adherentes. Las células se pueden lisar aspirando el medio y añadiendo 400ul del tampón de extracción como hemos comentado, seguido de 2 ciclos de congelación y descongelación. Esto debería ser suficiente para lisar todas las células. Si tiene un raspador de goma, puede raspar las monocapas del fondo de los pocillos después de la primera descongelación, dependiendo del aspecto de las células (intactas o lisadas). La identificación de las células lisadas será difícil sin una tinción de azul tripán, así que si tiene un pozo de repuesto podría comprobarlo antes de proceder. La tripsinización antes de la congelación/descongelación podría conducir a una lisis más completa de toda la población, pero no tenemos datos de una comparación y la diferencia probablemente variará entre las líneas celulares. Si tiene algunos pozos de réplica adicionales, podría probarlo usted mismo y comparar la eficacia de la tripsinización seguida de la congelación/descongelación 2X. La cuestión es si la tripsinización de las células metabólicamente activas cambiará las proporciones de NAD/NADH, tal vez oscureciendo las diferencias dentro del experimento.
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NAD (Nicotinamide adenine dinucleotide) Los procesos de respiración celular de todas las células vivas utilizan la coenzima Nicotinamide adenine dinucleotide (NAD). Desempeña un papel clave en el metabolismo energético al aceptar y donar electrones. La forma de baja energía NAD+ mostrada a la izquierda se eleva a la forma de alta energía NADH. El cambio de forma del grupo nicotinamida activo en el NADH se indica arriba. Acepta dos electrones y un hidrógeno al alcanzar el estado de alta energía. El NAD+ se utiliza en las reacciones redox de la célula y actúa como agente reductor. El NADH contribuye a la oxidación en procesos celulares como la glucólisis para ayudar a la oxidación de la glucosa.
La energía almacenada en esta coenzima reducida NADH es suministrada por el ciclo TCA en el proceso de respiración celular aeróbica y potencia el proceso de transporte de electrones en las membranas de las mitocondrias.
El NAD+ se utiliza principalmente en las vías catabólicas, como la glucólisis, que descompone las moléculas de energía para producir ATP. La relación entre el NAD+ y el NADH se mantiene muy alta en la célula, manteniéndolo fácilmente disponible para actuar como agente oxidante.
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Dado que la mayoría de los equivalentes reductores de la oxidación de sustratos se transfieren inicialmente a NAD+, es crucial una tasa suficiente de reoxidación de NADH para mantener el flujo de carbono en el metabolismo central. C. glutamicum posee una NADH deshidrogenasa Ndh de una sola subunidad que no bombea protones (Nantapong et al., 2005), pero no una NADH deshidrogenasa de tipo complejo I que bombea protones (Parey et al., 2020) ni una NADH deshidrogenasa de tipo Nqr que bombea iones de sodio (Steuber et al., 2014). El análisis de un mutante Δndh de C. glutamicum reveló una ligera disminución del crecimiento en placas de agar mínimo de glucosa y acetato y casi ningún defecto de crecimiento en medio mínimo de glucosa (Molenaar et al., 2000; Nantapong et al., 2004). Se propusieron dos sistemas alternativos que pueden acoplar la oxidación de NADH a la reducción de menaquinona y compensar así la falta de Ndh (Molenaar et al., 2000; Nantapong et al., 2004). Se trata de la malato deshidrogenasa dependiente de NAD+ Mdh (Genda et al., 2003) que actúa en conjunto con la malato:quinona oxidorreductasa Mqo asociada a la membrana, y la L-lactato deshidrogenasa dependiente de NAD+ LdhA que actúa en conjunto con la L-lactato deshidrogenasa asociada a la membrana LldD (Figura 1).